Javascript дар айни замон дар браузери шумо ғайрифаъол аст.Вақте ки JavaScript ғайрифаъол аст, баъзе функсияҳои ин вебсайт кор намекунанд.
Хавьер Фидалго, * Пьер-Антуан Деглесне, * Родриго Арройо, * Лилиан Сепулведа, * Евгения Раннева, Филипп Депрез, шӯъбаи илм, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Каталония, Испания * Ин муаллифон дар бораи ин кор каме фаҳмиш доранд Баробар замина саҳм: Кислотаи гиалуронӣ (HA) полисахариди табиист, ки дар истеҳсоли пуркунандаи пӯст бо мақсадҳои эстетикӣ истифода мешавад.Азбаски он дар бофтаҳои инсон ними умри чанд рӯз дорад, пуркунандаи пӯст дар асоси HA барои дароз кардани ҳаёти онҳо дар бадан ба таври кимиёвӣ тағир дода мешаванд.Тағироти маъмултарин дар пуркунандаҳои тиҷории HA ин истифодаи эфири 1,4-бутандиол диглицидил (BDDE) ҳамчун агенти пайвасткунанда барои пайваст кардани занҷирҳои HA мебошад.BDDE боқимонда ё реаксиянашуда дар <2 қисм дар як миллион (ppm) ғайризаҳрнок ҳисобида мешавад;аз ин рӯ, BDDE-и боқимонда дар пуркунандаи ниҳоии пӯст барои таъмини амнияти бемор бояд миқдораш муайян карда шавад.Маводҳо ва усулҳо: Ин тадқиқот ошкор ва тавсифи маҳсулоти иловагии реаксияи байниҳамдигарии байни BDDE ва HA дар шароити сілтӣ тавассути омезиши хроматографияи моеъ ва масс-спектрометрия (LC-MS) тавсиф мекунад.Натиҷаҳо: Пас аз таҳлилҳои гуногун маълум шуд, ки шароити сілтӣ ва ҳарорати баланд, ки барои безараргардонии гидрогели HA-BDDE истифода мешавад, ба ташаккули ин маҳсулоти нав, пайвастагии "пропиленгликол монанд" мусоидат кардааст.Таҳлили LC-MS тасдиқ кард, ки маҳсулоти иловагӣ дорои массаи моноизотопӣ бо BDDE, вақти дигари нигоҳдорӣ (tR) ва реҷаи тобиши ултрабунафш (λ=200 нм) мебошад.Баръакси BDDE, дар таҳлили LC-MS мушоҳида карда шуд, ки дар шароити якхелаи андозагирӣ, ин маҳсулоти иловагӣ дар 200 нм сатҳи баландтари ошкоркунӣ дорад.Хулоса: Ин натиҷаҳо нишон медиҳанд, ки дар сохтори ин пайвастагии нав эпоксид мавҷуд нест.Муҳокима барои арзёбии хатари ин маҳсулоти нав, ки дар истеҳсоли гидрогели HA-BDDE (пуркунандаи пӯсти HA) бо мақсадҳои тиҷоратӣ пайдо шудааст, кушода аст.Калидвожаҳо: кислотаи гиалуронӣ, пуркунандаи пӯсти HA, кислотаи гиалуронии ба ҳам алоқаманд, BDDE, таҳлили LC-MS, маҳсулоти иловагии BDDE.
Пуркунандаҳо дар асоси кислотаи гиалуронӣ (HA) маъмултарин ва маъмултарин пуркунандаи пӯст мебошанд, ки барои мақсадҳои косметикӣ истифода мешаванд.1 Ин пуркунандаи пӯст як гидрогел аст, ки одатан аз >95% об ва 0,5-3% ГА иборат аст, ки ба онҳо сохтори ба гел монанд медиҳад.2 HA полисахарид ва ҷузъи асосии матритсаи берун аз ҳуҷайраҳои устухонҳо мебошад.Яке аз компонентҳо.Он аз (1,4)-кислотаи глюкуронӣ-β (1,3)-N-ацетилглюкозамин (GlcNAc) иборат аст, ки воҳидҳои дисахаридҳои такроршавандаро бо пайвандҳои гликозидӣ пайваст мекунанд.Ин шакли дисахарид дар ҳама организмҳо якхела аст.Дар муқоиса бо баъзе пуркунандаи сафеда (масалан, коллаген), ин хосият HA-ро ба молекулаи хеле мувофиқи биологӣ табдил медиҳад.Ин пуркунандаҳо метавонанд хусусияти пайдарпайии аминокислотаро нишон диҳанд, ки онро системаи иммунии бемор эътироф мекунад.
Вақте ки ҳамчун пуркунандаи пӯст истифода мешавад, маҳдудияти асосии HA гардиши босуръати он дар бофтаҳо аз сабаби мавҷудияти як оилаи мушаххаси ферментҳо бо номи гиалуронидаза мебошад.То ба ҳол, якчанд тағиротҳои кимиёвӣ дар сохтори HA барои зиёд кардани нисфи ҳаёти HA дар бофтаҳо тавсиф карда шудаанд.3 Аксари ин тағиротҳо кӯшиш мекунанд, ки дастрасии гиалуронидазаро ба полимерҳои полисахарид тавассути пайваст кардани занҷирҳои HA кам кунанд.Аз ин рӯ, аз сабаби ташаккули пулҳо ва пайвандҳои байнимолекулярии ковалентӣ байни сохтори HA ва агенти байниҳамдигарӣ, гидрогели ба ҳам пайвастшуда HA нисбат ба HA табиӣ маҳсулоти таназзули ферментҳоро бештар тавлид мекунад.4-6
То ба ҳол, агентҳои кимиёвии байниҳамдигарӣ, ки барои тавлиди HA-и бо ҳам алоқаманд истифода мешаванд, иборатанд аз метакриламид, 7 гидразид, 8 карбодиимид, 9 дивинилсулфон, 1,4-бутандиол диглицидил эфир (BDDE) ва поли(этиленгликол) диглицидил эфир.10 ,11 BDDE дар айни замон агенти пайвасткунаки бештар истифодашаванда мебошад.Гарчанде ки ин намуди гидрогелҳо дар тӯли даҳсолаҳо бехатар будани худро исбот кардаанд, агентҳои пайвасткунандаи истифодашуда реактивҳои реактивӣ мебошанд, ки метавонанд ситотоксикӣ ва дар баъзе мавридҳо мутагенӣ бошанд.12 Аз ин рӯ, миқдори боқимондаи онҳо дар гидрогели ниҳоӣ бояд баланд бошад.BDDE вақте бехатар ҳисобида мешавад, ки консентратсияи боқимонда аз 2 қисм дар як миллион (ppm) камтар бошад.4
Якчанд усулҳои муайян кардани консентратсияи пасти боқимондаи BDDE, дараҷаи пайвастшавӣ ва мавқеи ивазкунӣ дар гидрогелҳои HA мавҷуданд, аз қабили хроматографияи газ, хроматографияи истисноии андоза дар якҷоягӣ бо масс-спектрометрия (MS), усулҳои ченкунии флуорессенси ядроии резонанси магнитӣ (NMR) ва Массиви диод бо хроматографияи моеъи баландсифат (HPLC).13-17 Тадқиқоти мазкур ошкор ва тавсифи маҳсулоти иловагиро дар гидрогели ниҳоии ба ҳам алоқаманди HA, ки дар натиҷаи реаксияи BDDE ва HA дар шароити сілтӣ тавлид шудааст, тавсиф мекунад.HPLC ва хроматографияи моеъ-спектрометрия (таҳлили LC-MS).Азбаски заҳролудшавии ин маҳсулоти иловагии BDDE номаълум аст, мо тавсия медиҳем, ки миқдори боқимондаи он бояд ба усули шабеҳе, ки одатан дар BDDE дар маҳсулоти ниҳоӣ анҷом дода мешавад, муайян карда шавад.
Намаки натрийи ба даст овардаи HA (Shiseido Co., Ltd., Токио, Ҷопон) дорои вазни молекулавии ~1,368,000 Да (усули Лоран) 18 ва часпакии дохилии 2,20 м3/кг мебошад.Барои реаксияи байниҳамдигарӣ, BDDE (≥95%) аз Sigma-Aldrich Co. (Сент-Луис, MO, ИМА) харида шудааст.Шӯри фосфати буферӣ бо pH 7,4 аз ширкати Sigma-Oldrich харида шудааст.Ҳама ҳалкунандаҳо, ацетонитрил ва обе, ки дар таҳлили LC-MS истифода мешаванд, аз сифати дараҷаи HPLC харида шудаанд.Кислотаи формикӣ (98%) ҳамчун реагент харида мешавад.
Ҳама таҷрибаҳо дар системаи UPLC Acquity (Waters, Milford, MA, ИМА) анҷом дода шуданд ва ба спектрометри массаи сегонаи API 3000 пайваст карда шуданд, ки бо манбаи ионизатсияи электроспрей муҷаҳҳаз шудааст (AB SCIEX, Framingham, MA, ИМА).
Синтези гидрогелҳои ба ҳам алоқаманд бо илова кардани 198 мг BDDE ба маҳлули 10% (w/w) гиалуронати натрий (NaHA) дар ҳузури 1% сілтӣ (гидроксиди натрий, NaOH) оғоз ёфт.Консентратсияи ниҳоии BDDE дар омехтаи реаксия 9,9 мг/мл (0,049 мМ) буд.Сипас, омехтаи реаксия бодиққат омехта ва гомогенизатсия карда шуд ва иҷозат дод, ки дар 45 ° C барои 4 соат идома ёбад.19 РН-и реаксия дар ~12 нигоҳ дошта мешавад.
Пас аз он, омехтаи реаксия бо об шуста шуд ва гидрогели ниҳоии HA-BDDE филтр карда шуд ва бо буфери PBS барои ноил шудан ба консентратсияи HA аз 10 то 25 мг/мл ва рН ниҳоии 7,4 фасод карда шуд.Барои стерилизатсия кардани гидрогелҳои ба ҳам алоқаманди HA истеҳсолшуда, ҳамаи ин гидрогелҳо автоклав карда мешаванд (120°С барои 20 дақиқа).Гидрогели тозашудаи BDDE-HA то таҳлил дар 4°C нигоҳ дошта мешавад.
Барои таҳлили BDDE, ки дар маҳсулоти ба ҳам алоқаманди HA мавҷуд аст, намунаи 240 мг вазн карда, ба сӯрохи марказӣ ворид карда шуд (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, ИМА; ҳаҷм 0,5 мл) ва дар ҳарорати хонагӣ дар 10,000 rpm центрифуга карда шуд. 10 дақиқа.Ҳамагӣ 20 мкл моеъи поёноб ҷамъоварӣ ва таҳлил карда шуд.
Барои таҳлили стандарти BDDE (Sigma-Aldrich Co) дар шароити сілтӣ (1%, 0,1% ва 0,01% NaOH), агар шартҳои зерин риоя шаванд, намунаи моеъ 1:10, 1:100 ё то 1:1,000,000 Агар лозим бошад, барои таҳлил оби деионизатсияшудаи MilliQ-ро истифода баред.
Барои маводи ибтидоие, ки дар реаксияи байниҳамдигарӣ истифода мешаванд (HA 2%, H2O, 1% NaOH ва 0,049 mM BDDE), 1 мл ҳар як намунаи аз ин мавод омодашуда бо истифода аз ҳамон шароити таҳлил таҳлил карда шуд.
Барои муайян кардани хусусияти қуллаҳои дар харитаи ион пайдошуда, ба намунаи 20 мкл 10 мкл маҳлули стандартии 100 ppb BDDE (Sigma-Aldrich Co) илова карда шуд.Дар ин ҳолат, консентратсияи ниҳоии стандарт дар ҳар як намуна 37 ppb аст.
Аввалан, маҳлули саҳомии BDDE-ро бо консентратсияи 11,000 мг/л (11,000 ppm) бо роҳи ҳал кардани 10 мкл BDDE стандартӣ (Sigma-Aldrich Co) бо оби 990 мкл MilliQ (зичии 1,1 г/мл) омода кунед.Ин маҳлулро барои тайёр кардани маҳлули 110 мкг/л (110 ppb) BDDE ҳамчун маҳлули стандартии мобайнӣ истифода баред.Сипас, барои тайёр кардани каҷи стандартии мобайнӣ BDDE-ро (110 ppb) истифода баред, бо чанд маротиба обшавии мобайнӣ барои ноил шудан ба консентратсияи дилхоҳи 75, 50, 25, 10 ва 1 ppb.Тавре ки дар расми 1 нишон дода шудааст, муайян карда шудааст, ки каҷи стандартии BDDE аз 1,1 то 110 ppb хатти хуб дорад (R2>0,99).Каҷи стандартӣ дар чор таҷрибаи мустақил такрор карда шуд.
Расми 1 Кабри калибрченкунии стандартии BDDE, ки тавассути таҳлили LC-MS ба даст оварда шудааст, ки дар он таносуби хуб мушоҳида мешавад (R2>0,99).
Ихтисорот: BDDE, 1,4-бутандиол диглицидил эфир;LC-MS, хроматографияи моеъ ва масс-спектрометрия.
Барои муайян ва муайян кардани стандартҳои BDDE, ки дар HA бо ҳам алоқаманд ва стандартҳои BDDE дар ҳалли асосӣ мавҷуданд, таҳлили LC-MS истифода шудааст.
Ҷудокунии хроматографӣ дар сутуни LUNA 2,5 мкм C18(2)-HST (50×2,0 мм2; Phenomenex, Torrance, CA, ИМА) ба даст оварда шуд ва ҳангоми таҳлил дар ҳарорати хонагӣ (25°C) нигоҳ дошта шуд.Марҳилаи сайёр аз ацетонитрил (ҳалкунандаи А) ва об (ҳалкунандаи В) иборат аст, ки дар таркибаш 0,1% кислотаи формин дорад.Марҳилаи мобилӣ тавассути элюсияи градиентӣ тоза карда мешавад.Градиент чунин аст: 0 дақиқа, 2% A;1 дақиқа, 2% А;6 дақиқа, 98% А;7 дақиқа, 98% А;7,1 дақиқа, 2% А;10 дақиқа, 2% A. Вақти кор 10 дақиқа ва ҳаҷми тазриқ 20 мкл аст.Вақти нигоҳдории BDDE тақрибан 3,48 дақиқа аст (аз 3,43 то 4,14 дақиқа дар асоси таҷрибаҳо).Марҳилаи мобилӣ бо суръати ҷараёни 0,25 мл/дақ барои таҳлили LC-MS насос карда шуд.
Барои таҳлили BDDE ва муайян кардани миқдор аз ҷониби MS, системаи UPLC (Обҳо) бо як спектрометри массаи чоргонаи API 3000 (AB SCIEX), ки бо манбаи ионизатсияи электроспрей муҷаҳҳаз шудааст, муттаҳид карда мешавад ва таҳлил дар ҳолати ионҳои мусбат (ESI+) анҷом дода мешавад.
Мувофики тахлили фрагменти ион, ки дар BDDE гузаронида шуд, порчаи дорои шиддати баландтарин порчае мебошад, ки ба 129,1 Да рост меояд (расми 6).Аз ин рӯ, дар режими мониторинги бисёр-ионӣ (MIM) барои ченкунӣ, табдили масса (таносуби масса ба заряд [м/з]) BDDE 203,3/129,1 Да мебошад.Он инчунин барои таҳлили LC-MS реҷаи пурраи скан (FS) ва реҷаи сканкунии ионҳои маҳсулот (PIS) -ро истифода мебарад.
Барои санҷидани хусусияти усул намунаи холӣ (марҳилаи ибтидоии мобилӣ) таҳлил карда шуд.Дар намунаи холӣ бо табдили массаи 203,3/129,1 Да ягон сигнал муайян карда нашуд.Оид ба такроршавандагии таҷриба, 10 тазриқҳои стандартии 55 ppb (дар мобайни каҷи калибрченкунӣ) таҳлил карда шуданд, ки дар натиҷа инҳироҷи стандартии боқимонда (RSD) <5% (маълумот нишон дода нашудааст).
Мазмуни боқимондаи BDDE дар ҳашт гидрогелҳои ба ҳампайвастаи HA-и автоклавии BDDE, ки ба чаҳор таҷрибаҳои мустақил мувофиқанд, муайян карда шуд.Тавре ки дар бахши “Материалҳо ва усулҳо” тавсиф шудааст, миқдор аз рӯи арзиши миёнаи каҷи регрессионии ҳалкунии стандартии BDDE арзёбӣ мешавад, ки ба қуллаи беназире, ки дар гузариши массаи BDDE 203,3/129,1 Да бо нигоҳдорӣ муайян шудааст, мувофиқат мекунад. вақт аз 3,43 ба 4,14 дақиқа Интизор нест.Дар расми 2 намунаи хроматограммаи стандарти истинод ба BDDE 10 ppb нишон дода шудааст.Ҷадвали 1 мундариҷаи боқимондаи BDDE-и ҳашт гидрогели гуногунро ҷамъбаст мекунад.Диапазони арзиш аз 1 то 2,46 ppb аст.Аз ин рӯ, консентратсияи боқимондаи BDDE дар намуна барои истифодаи инсон қобили қабул аст (<2 ppm).
Тасвири 2 Хроматограммаи ионии 10 ppb стандарти истинод BDDE (Sigma-Aldrich Co), MS (m/z) гузариш, ки тавассути таҳлили LC-MS 203,30/129,10 Да (дар ҳолати мусбати MRM) ба даст оварда шудааст.
Ихтисорот: BDDE, 1,4-бутандиол диглицидил эфир;LC-MS, хроматографияи моеъ ва масс-спектрометрия;MRM, мониторинги реаксияҳои сершумор;MS, масса;м/з, таносуби масса ба заряд.
Эзоҳ: Намунаҳои 1-8 гидрогелҳои ба салиб пайвастшудаи HA бо автоклави BDDE мебошанд.Миқдори боқимондаи BDDE дар гидрогел ва қуллаи вақти нигоҳдории BDDE низ гузориш дода мешавад.Ниҳоят, мавҷудияти қуллаҳои нав бо вақтҳои гуногуни нигоҳдорӣ низ гузориш дода мешавад.
Ихтисорот: BDDE, 1,4-бутандиол диглицидил эфир;HA, кислотаи гиалурон;MRM, мониторинги реаксияҳои сершумор;tR, вақти нигоҳдорӣ;LC-MS, хроматографияи моеъ ва масс-спектрометрия;RRT, вақти нисбии нигоҳдорӣ.
Тааҷҷубовар аст, ки таҳлили хроматограммаи ионҳои LC-MS нишон дод, ки дар асоси ҳама намунаҳои ба ҳам алоқаманди автоклавии гидрогели HA, ки таҳлил карда шудаанд, дар вақти кӯтоҳтари нигоҳдорӣ аз 2,73 то 3,29 дақиқа авҷи иловагӣ мавҷуд аст.Масалан, расми 3 хроматограммаи ионии намунаи ба ҳам алоқаманди HA-ро нишон медиҳад, ки дар он қуллаи иловагӣ дар вақти дигари нигоҳдорӣ тақрибан 2,71 дақиқа пайдо мешавад.Вақти нигоҳдории нисбии мушоҳидашуда (RRT) байни қуллаи нав мушоҳидашуда ва қуллаи BDDE 0,79 муайян карда шуд (Ҷадвали 1).Азбаски мо медонем, ки қуллаи нав мушоҳидашуда дар сутуни C18, ки дар таҳлили LC-MS истифода мешавад, камтар нигоҳ дошта мешавад, қуллаи нав метавонад нисбат ба BDDE ба пайвастагии қутбтар мувофиқат кунад.
Тасвири 3 Хроматограммаи ионии намунаи бо ҳам алоқаманди гидрогели HA, ки аз ҷониби LC-MS ба даст оварда шудааст (табдили массаи MRM 203,3/129,0 Да).
Ихтисорот: HA, кислотаи гиалурон;LC-MS, хроматографияи моеъ ва масс-спектрометрия;MRM, мониторинги реаксияҳои сершумор;RRT, вақти нисбии нигоҳдорӣ;tR, вақти нигоҳдорӣ.
Барои истисно кардани эҳтимолияти он, ки қуллаҳои нави мушоҳидашуда метавонанд ифлоскунандаҳои дар ашёи хоми истифодашуда мавҷуд бошанд, ин ашёи хом низ бо истифода аз ҳамон усули таҳлили LC-MS таҳлил карда шуданд.Маводи ибтидоии таҳлилшуда об, 2% NaHA дар об, 1% NaOH дар об ва BDDE бо ҳамон консентратсияи дар реаксияи байниҳамдигарӣ истифодашаванда иборат аст.Хроматограммаи ионии маводи ибтидоии истифодашуда ягон пайвастагӣ ё қулла нишон надодааст ва вақти нигоҳдории он ба қуллаи нави мушоҳидашуда мувофиқат мекунад.Ин далел ақидаро рад мекунад, ки на танҳо маводи ибтидоӣ метавонад ҳама гуна пайвастагиҳо ё моддаҳоеро дар бар гирад, ки метавонанд ба раванди таҳлил халал расонанд, аммо аломати ифлосшавии эҳтимолӣ бо дигар маҳсулоти лабораторӣ вуҷуд надорад.Қиматҳои консентратсияи пас аз таҳлили LC-MS BDDE ва қуллаҳои нав ба даст овардашуда дар ҷадвали 2 (намунаҳои 1-4) ва хроматограммаи ионҳо дар расми 4 нишон дода шудаанд.
Эзоҳ: Намунаҳои 1-4 ба ашёи хоме мувофиқат мекунанд, ки барои истеҳсоли гидрогелҳои ба ҳам алоқаманд бо автоклавшудаи BDDE HA истифода мешаванд.Ин намунаҳо автоклав карда нашудаанд.
Ихтисорот: BDDE, 1,4-бутандиол диглицидил эфир;HA, кислотаи гиалурон;LC-MS, хроматографияи моеъ ва масс-спектрометрия;MRM, мониторинги реаксияҳои сершумор.
Расми 4 ба хроматограммаи LC-MS-и намунаи ашёи хом, ки дар реаксияи байниҳамдигарии HA ва BDDE истифода мешавад, мувофиқат мекунад.
Эзоҳ: Ҳамаи инҳо дар ҳамон консентратсия ва таносуб чен карда мешаванд, ки барои анҷом додани реаксияи байниҳамдигарӣ истифода мешаванд.Рақамҳои ашёи хоми аз ҷониби хроматограмма таҳлилшуда мувофиқат мекунанд: (1) об, (2) 2% маҳлули обии ГА, (3) 1% маҳлули обии NaOH.Таҳлили LC-MS барои табдили оммавии 203,30/129,10 Да (дар ҳолати мусбати MRM) анҷом дода мешавад.
Ихтисорот: BDDE, 1,4-бутандиол диглицидил эфир;HA, кислотаи гиалурон;LC-MS, хроматографияи моеъ ва масс-спектрометрия;MRM, мониторинги реаксияҳои сершумор.
Шароите, ки боиси ба вучуд омадани куллахои нав гардиданд, омухта шуданд.Барои омӯхтани он, ки чӣ гуна шароити реаксияе, ки барои истеҳсоли гидрогели ба ҳам алоқаманд истифода мешавад, ба реактивии агенти байниҳамдигарии BDDE таъсир мерасонад, ки боиси пайдоиши қуллаҳои нав (маҳсулоти эҳтимолии иловагӣ) мегардад, ченакҳои гуногун гузаронида шуданд.Дар ин муайянкунӣ, мо пайвандгари ниҳоии BDDE-ро омӯхта ва таҳлил кардем, ки бо консентратсияи гуногуни NaOH (0%, 1%, 0.1% ва 0.01%) дар муҳити обӣ коркард карда шуда, пас аз автоклавкунӣ ё бидуни он.Тартиби бактерияҳо барои тақлид кардани шароитҳои якхела бо усуле, ки барои истеҳсоли гидрогели ба ҳам алоқаманд HA истифода мешавад, ҳамон аст.Тавре ки дар бахши "Материалҳо ва усулҳо" тавсиф шудааст, гузариши оммавии намуна аз ҷониби LC-MS ба 203.30/129.10 Да таҳлил карда шуд.BDDE ва консентратсияи қуллаи нав ҳисоб карда шуда, натиҷаҳо дар ҷадвали 3 нишон дода шудаанд. Дар намунаҳое, ки автоклав нашудаанд, новобаста аз мавҷудияти NaOH дар маҳлул (намунаҳои 1-4, Ҷадвали 1-4, Ҷадвали 1-4) қуллаҳои нав ошкор карда нашудаанд. 3).Барои намунаҳои автоклавӣ, қуллаҳои нав танҳо дар ҳузури NaOH дар маҳлул ошкор карда мешаванд ва пайдоиши қулла аз консентратсияи NaOH дар маҳлул вобаста аст (намунаҳои 5-8, Ҷадвали 3) (RRT = 0,79).Дар расми 5 намунаи хроматограммаи ионӣ нишон дода шудааст, ки ду намунаи автоклавиро дар ҳузур ё набудани NAOH нишон медиҳад.
Ихтисорот: BDDE, 1,4-бутандиол диглицидил эфир;LC-MS, хроматографияи моеъ ва масс-спектрометрия;MRM, мониторинги реаксияҳои сершумор.
Эзоҳ: Хроматограммаи боло: Намуна бо маҳлули обии 0,1% NaOH коркард ва автоклав карда шуд (120°С барои 20 дақиқа).Хроматограммаи поён: Намуна бо NaOH коркард нашудааст, балки дар як шароит автоклав карда шуд.Табдилоти оммавии 203.30/129.10 Да (дар ҳолати мусбати MRM) аз ҷониби LC-MS таҳлил карда шуд.
Ихтисорот: BDDE, 1,4-бутандиол диглицидил эфир;LC-MS, хроматографияи моеъ ва масс-спектрометрия;MRM, мониторинги реаксияҳои сершумор.
Дар ҳама намунаҳои автоклавшуда, бо NaOH ё бидуни он, консентратсияи BDDE хеле кам шуд (то 16,6 маротиба) (намунаҳои 5-8, Ҷадвали 2).Паст шудани консентратсияи BDDE метавонад аз он сабаб бошад, ки дар ҳарорати баланд об метавонад ҳамчун асос (нуклеофил) амал кунад, то ҳалқаи эпоксиди BDDE-ро кушояд ва пайвастагии 1,2-диолро ташкил диҳад.Сифати моноизотопии ин пайвастагӣ аз BDDE фарқ мекунад ва аз ин рӯ, таъсир намерасонад.LC-MS тағирёбии оммавии 203.30 / 129.10 Да-ро муайян кард.
Ниҳоят, ин таҷрибаҳо нишон медиҳанд, ки тавлиди қуллаҳои нав аз мавҷудияти BDDE, NAOH ва раванди автоклавкунӣ вобаста аст, аммо бо HA ҳеҷ иртиботе надорад.
Қуллаи наве, ки дар вақти нигоҳдорӣ тақрибан 2,71 дақиқа пайдо шуд, пас бо LC-MS тавсиф карда шуд.Бо ин мақсад, BDDE (9,9 мг/мл) дар маҳлули обии 1% NaOH инкубатсия карда, автоклав карда шуд.Дар ҷадвали 4, хусусиятҳои қуллаи нав бо қуллаи маълуми истинод ба BDDE муқоиса карда мешаванд (вақти нигоҳдорӣ тақрибан 3,47 дақиқа).Дар асоси тахлили фрагментацияи ионхои ду кулла метавон ба хулоса омад, ки кулла бо давомнокии нигохдории 2,72 дакика хамон порчахоеро, ки пики BDDE дорад, вале бо шиддатнокии гуногун нишон медихад (расми 6).Барои қуллаи мувофиқ ба вақти нигоҳдорӣ (PIS) 2,72 дақиқа, қуллаи шадидтар пас аз тақсимшавӣ дар массаи 147 Да мушоҳида шуд.Дар консентратсияи BDDE (9,9 мг/мл), ки дар ин муайянкунӣ истифода шудааст, пас аз ҷудокунии хроматографӣ низ режимҳои гуногуни абсорбатсия (УВ, λ=200 нм) дар спектри ултрабунафш мушоҳида карда шуданд (Расми 7).Қуллаи бо вақти нигоҳдорӣ 2,71 дақиқа дар 200 нм намоён аст, дар ҳоле ки қуллаи BDDE дар хроматограмма дар ҳамон шароит мушоҳида намешавад.
Ҷадвали 4 Натиҷаҳои тавсифи қуллаи нав бо вақти нигоҳдорӣ тақрибан 2,71 дақиқа ва қуллаи BDDE бо вақти нигоҳдорӣ 3,47 дақиқа
Эзоҳ: Барои ба даст овардани ин натиҷаҳо, таҳлилҳои LC-MS ва HPLC (MRM ва PIS) дар ду қулла анҷом дода шуданд.Барои таҳлили HPLC, ташхиси ултрабунафш бо дарозии мавҷи 200 нм истифода мешавад.
Ихтисорот: BDDE, 1,4-бутандиол диглицидил эфир;HPLC, хроматографияи моеъи баланд;LC-MS, хроматографияи моеъ ва масс-спектрометрия;MRM, мониторинги реаксияҳои сершумор;м/з, таносуби масса ба заряд;PIS, сканеркунии ионҳои маҳсулот;нури ултрабунафш, нури ултрабунафш.
Эзоҳ: Порчаҳои оммавӣ тавассути таҳлили LC-MS (PIS) ба даст оварда шудаанд.Хроматограммаи боло: спектри оммавии порчаҳои намунаи стандартии BDDE.Хроматограммаи поён: спектри массаи қуллаи нав ошкор шуд (RRT, ки бо қуллаи BDDE алоқаманд аст 0,79 аст).BDDE дар маҳлули 1% NaOH коркард ва автоклав карда шуд.
Ихтисорот: BDDE, 1,4-бутандиол диглицидил эфир;LC-MS, хроматографияи моеъ ва масс-спектрометрия;MRM, мониторинги реаксияҳои сершумор;PIS, сканкунии ионҳои маҳсулот;RRT, вақти нисбии нигоҳдорӣ.
Тасвири 7 Хроматограммаи ионии иони пешгузаштаи 203,30 Да ва (A) қуллаи нав бо вақти нигоҳдорӣ 2,71 дақиқа ва (B) кашфи ултрабунафш аз қуллаи стандарти BDDE дар 3,46 дақиқа дар 200 нм.
Дар ҳама гидрогелҳои ба ҳам алоқаманди HA истеҳсолшуда мушоҳида карда шуд, ки консентратсияи боқимондаи BDDE пас аз муайянкунии миқдори LC-MS <2 ppm буд, аммо дар таҳлил қуллаи нави номаълум пайдо шуд.Ин қуллаи нав ба маҳсулоти стандартии BDDE мувофиқат намекунад.Маҳсулоти стандартии BDDE низ дар реҷаи мусбати MRM аз ҳамон як табдили сифат (конверсиатсияи MRM 203.30/129.10 Da) гузаштааст.Умуман, усулҳои дигари таҳлилӣ ба монанди хроматография ҳамчун санҷишҳои маҳдуд барои муайян кардани BDDE дар гидрогелҳо истифода мешаванд, аммо маҳдудияти максималии ошкор (LOD) каме камтар аз 2 ppm аст.Аз тарафи дигар, то ба ҳол, NMR ва MS барои тавсифи дараҷаи пайвастшавӣ ва / ё тағир додани HA дар порчаҳои воҳиди шакарии маҳсулоти ба ҳам алоқаманди HA истифода шудаанд.Ҳадафи ин усулҳо ҳеҷ гоҳ миқдори муайянкунии боқимондаи BDDE дар чунин консентратсияи паст набуд, ки мо дар ин мақола тавсиф мекунем (LOD усули LC-MS мо = 10 ppb).
Вақти фиристодан: сентябр-01-2021